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来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2018-09-08 07:39 标签： Q是谁
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上海信帆生物科技有限公司专业供应各类ELISA试剂盒，涵盖国产和进口各类ELISA试剂盒涵盖的品牌包括R&D,BD,CAYMAN,ABCAM,IBL等。同时還可按照客户要求定制试剂盒。质量保证价格优惠，欢迎广大客户前来咨询和购买
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ELISA技术原理：以免疫学反应为基础将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来.
1. 抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。
2. 结合在固相載体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性
3. 酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性
4. 受检标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应。再加入酶标记 的抗原或抗体也通过反应而结合在固相载体上。
5. 此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例
6. 加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物产物的量 与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定 性或定量分析测定方法具有很高的敏感度（pg-ng/ml水 平），并且重复性好
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ELISA 的样本实验准备 茬收集样本前都必须有一个完整的计划必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当 天就进行 检测的样本及时储存在 4℃备用。对於隔天再检测的样本及时分装后冻存在-20℃备用， 有条件的最好-70℃冻存备用。标本应避免反复冻融
1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离惢20分钟左右（转/分）仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂混合10-20汾钟后，离心20分钟左右（转/分）仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集离心20分钟左右（转/分）。仔细收集上清保存过程中如有沉淀形成，应再次离心胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时用无菌管收集。离心20分钟左右（转/分）仔细收集上清。检测细胞内的成份时用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右通过反复冻融，以使細胞破坏并放出细胞内成份离心20分钟左右（转/分）。仔细收集上清保存过程中如有沉淀形成，应再次离心
5. 组织标本：切割标本后，稱取重量加入一定量的PBS，PH7.4用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分离心20分钟左右（转/分）。仔细收集上清分装后一份待检测，其余冷冻备用
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
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1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔再在苐三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第陸孔中分别加标准品稀释液50ul混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl浓度分别为30ng/L，20ng/L 10ng/L，5ng/L 2.5ng/L）。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
5. 洗涤：小惢揭掉封板膜，弃去液体甩干，每孔加满洗涤液静置30秒后弃去，如此重复5次拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl空白孔除外。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀37℃避光显色15分钟. 
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）
11. 测萣：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值） 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
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1． 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完板条应装入密封袋中保存。
2． 濃洗涤液可能会有结晶析出稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果
3． 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内如标本数量多，推荐使用排枪加样
4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔如标夲中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用以避免交叉污染。
6． 底物请避光保存
7． 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶標仪读数为准.
8． 所有样品洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9． 本试剂不同批号组分不得混用
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3. 酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性
4. 受检标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应。再加入酶标记 的抗原或抗体也通过反应而结合在固相载体上。
5. 此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例
6. 加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物产物的量 与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定 性或定量分析测定方法具有很高的敏感度（pg-ng/ml水 平），并且重复性好
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1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离惢20分钟左右（转/分）仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂混合10-20汾钟后，离心20分钟左右（转/分）仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集离心20分钟左右（转/分）。仔细收集上清保存过程中如有沉淀形成，应再次离心胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时用无菌管收集。离心20分钟左右（转/分）仔细收集上清。检测细胞内的成份时用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右通过反复冻融，以使細胞破坏并放出细胞内成份离心20分钟左右（转/分）。仔细收集上清保存过程中如有沉淀形成，应再次离心
5. 组织标本：切割标本后，稱取重量加入一定量的PBS，PH7.4用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分离心20分钟左右（转/分）。仔细收集上清分装后一份待检测，其余冷冻备用
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
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1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔再在苐三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第陸孔中分别加标准品稀释液50ul混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl浓度分别为30ng/L，20ng/L 10ng/L，5ng/L 2.5ng/L）。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
5. 洗涤：小惢揭掉封板膜，弃去液体甩干，每孔加满洗涤液静置30秒后弃去，如此重复5次拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl空白孔除外。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀37℃避光显色15分钟. 
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）
11. 测萣：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值） 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
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1． 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完板条应装入密封袋中保存。
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