NF-USENF是什么标准意思

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2019-12-27 04:03 标签： NF的意思

试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）往预先包被小鼠核因子κB（NF-κB）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体经过温育并彻底洗滌。用底物TMB显色TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成至终的黄色颜色的深浅和样品中的小鼠核因子κB（NF-κB）呈囸相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值）计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法

1.  血清：使用不含热原和内毒素的试管操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.  血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝3000转离心30分钟取上清。

3.  細胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物

4.  组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清

5.  保存：如果样本收集后不及時检测，请按一次用量分装冻存于-20℃，避免反复冻融在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

  1.   试剂盒保存在2-8℃使用前室温平衡60分鍾。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用样本在使用前也要在室温平衡60分钟。
  2.   实验Φ不用的板条应立即放回自封袋中密封（低温干燥）保存。
  3.   预处理后的样本无需稀释直接取10μL加样即可。
  4.   严格按照说明书中标明的时間、加液量及顺序进行温育操作
  5.   所有液体组分使用前充分摇匀。

 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸餾水。

  1.   手工洗板：甩尽孔内液体每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体在吸水纸上拍干，如此洗板5次
  1.   从室温平衡60min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃
  2.   设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
  3.   待测样本孔先加待测样本10μL再加样本稀释液40μL；
  4.   随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
  5.   弃去液体吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液静置1min，甩去洗涤液吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）

 绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线按曲线方程计算各样本浓度值。

  •  准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值大于等于0.9900。
  •  特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应
  •  重复性：板内变异系数小于10%、板间变异系数小于15%。
  •  贮藏：2-8℃避光防潮保存。
  •   试剂盒仅供研究使用不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果由实验者承担，本公司概不负责
  •   严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作后果由实验者承担。

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