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(曲靖师范学院曲靖655011) 摘 要 采用电沉积方法将 Pd纳米颗粒沉积到玻碳电极(GCE)表面 ,再将Pd纳米颗粒修饰电极插入 HSO 溶液中吸收适量活性氢后,转移到 HAuC1溶液中静置一定时间后,使金被活性氢还原并自发沉积到Pd纳 米颗粒修饰的玻碳电极表面通过 自组装作用将带巯基的凝血酶适配体 I固定在 Pd—Au/GCE表面,制得非 标记型凝姐酶适配体传感器当凝血酶与凝血酶适配体结合时,覆盖在电极表面从而阻碍了电极表面的 Pd.Au纳米颗粒对HO 的催化还原活性 ,通过监测H:O 还原电流的减小程度 实现对凝血酶的定量检测。 考察了pH值、培育时间等实验条件对响应电流的影响以及 Pd—Au纳米颗粒的协同作用实验表明,此传感 器的线性范围为3.0~300nmo]/L检出限为0.98nmol/L。 关键词 非标记 ;适配体传感器;凝血酶;Pd—Au纳米颗粒 1 引 言 适配体是由指数富集的配基系统进化技术 (SELEX)Ill所筛选得到的功能性寡核苷酸短片段这些短 核苷酸片段可用于灵敏、专一地检测能与其有特异性结合的分子,如金属离孓、有机小分子化合物、代谢物 和蛋 白质等 与抗体相比,适配体具有明显优点如保存容易、重现f生好、容易修饰和方便再生等 。 凝血酶 是人体血液中一种重要的丝氨酸蛋白质在止血的生理和病理过程中起关键作用的蛋 白 水解酶。其在脑出血后的病理生理学过程中起重偠作用抑制凝血酶的活性对治疗脑出血有重要的临 床意义_8J。因而检测凝血酶对治疗人体疾病具有重要价值基于电化学生物传感器检测凝血酶被广 泛报道 。Wang等 报道了一种标记型的电化学适配体传感器用来检测凝血酶主要是用凝血酶的两 段适配体与 目标物的特异性结合而形成 “三明治”结构,在其:[作 中适配体 I被 FcSH/SiNCs标记 ,适 配体 Ⅱ被固定在被链霉亲和素修饰的磁珠一端当凝血酶出现时,适配体 I和适配體 Ⅱ与凝血酶特异 性结合形成一种的特殊的夹心结构其检测线性范围是 0.1~5.0nmol/L,检 出限为 0.06nmolfL Huang等… 研制 了一种基于量子点标记 的电化學发光传感器用来检测凝血酶,在其检测中凝血酶适 配体 I被固定在金电极上,适配体 Ⅱ被量子点标记由于两段适配体与同一个 目标物均有特异性结合, 很容易形成 “三明治”结构通过其结合后适配体构型改变来检测凝血酶的浓度。线性范围是 0~20mg/LWang等 ¨研制了一种将适配体固定在氧化石墨烯 (GO)表面的电化学免疫适配体传感 器。通过物理吸附GO固定在玻碳电极或金电极表面因氨基化的适配体与氧化石墨烯表面的.COOH之 间的化学键作用将适配体固定在石墨烯修饰 电极的表面。将功能化的适配体分为两段互补的一段通过内 嵌的方式包裹着 Ru(phen) 并作為探针。当无凝血酶时Ru(phen) 在电极表面传感器有高的电信号; 而加入凝血酶后,适配体与凝血酶特异性结合Ru(phen);被释放电化学信号减弱,并鉯此在确定凝血酶 的浓度该传感器的线性范围是O.9pmo]/L~226nmol/L。Yi等 ¨研制了一种以核酸外切酶催化回收 目 标物和酶催化的电化学适配体传感器用于凝血酶的测定在 3.巯丙基三甲氧基硅烷的表面大量的植入乙 醇脱氢酶(ADH)后呈现出可变的多孔结构,再将金纳米颗粒固定在其表面用於催化NADH为了提高电化 学响应信号,在 daDNA的一端标记亚 甲基蓝当凝血酶和Recjf的混合物出现时,凝血酶的适配体 I和适 配体 Ⅱ特异性结合此时核酸外切酶将凝血酶适配体 Ⅱ从5一+3方向降解,释放

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