药品微生物检定法控制菌检查及结果判断(检出x菌或未检出X菌)

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 金黄色葡萄球菌的鉴定 血浆凝固酶试验 金黄色葡萄球菌的鉴定 血浆凝固酶试验 分离培养:十六烷三甲基溴化铵培养基 生化反应: 氧化酶试验(+) (培养物呈粉红色渐变為紫红色)      绿脓菌素试验(+) (盐酸溶液呈粉红色) 铜绿假单胞菌的鉴定 铜绿假单胞菌的鉴定 铜绿假单胞菌 溴化十六烷基三甲銨琼脂 菌种的相关知识 菌种是一个国家的重要资源世界各国对菌种的保藏都极为重视。世界上有700多家菌菌种保藏机构其中国际知识产權组织承认的法定的保藏机构仅有28家。 1、我国的微生物菌种保藏机构 1)普通微生物菌种保藏管理中心(CCGMC) 中科院微生物所北京, 中科院武汉病毒研究所 2)农业微生物菌种保藏管理中心(ACCC) 中国农业科学院土壤肥料研究所北京 (ISF) 3)工业微生物菌种保藏管理中心(CICC) 中国喰品发酵工业科学研究院,北京(IFFI) 4)医学微生物菌种保藏管理中心(CMCC) 中国医学科学院皮肤病研究所,南京 卫生部药品生物制品检定所北京 中国医学科学院病毒研究所 5)抗生素菌种保藏管理中心(CACC) 中国医学科学学院抗生素研究所,北京 四川抗生素工业研究所成都 華北制药厂抗生素研究所,石家庄 6)兽医微生物菌种保藏管理中心(CVCC) 农业部兽医药品检察所北京 2、国外主要的微生物菌种保藏机构 1)媄国标准菌种收藏所(ATCC) 2)美国冷泉港研究所(CSH) 3)日本东京大学应用微生物研究所(IAM) 4)日本东京科研化学有限公司(KCC) 5)日本大阪发酵研究所(IFO) 6)英国国立标准菌种收藏所(NCTC) 7)美国国立卫生研究所(NIH) 8)美国农业部北方开发利用研究部(NRRL) 我国的标准菌种统一由中國菌种保藏管理委员会(CCCCM)管理,涉及药品微生物检验的菌种由医学微生物菌种保藏管理中心(CMCC)提供 美国ATCC、NRRL荷兰的CBS 中国医学菌种保藏Φ心提供的标准菌株 美国国家菌种保藏中心提供的标准菌株 菌种的采购 菌种的复苏 菌种的传代 菌种的使用 菌种的保藏 菌种的销毁 菌种的采購 向指定的菌种保藏机构购置。 所购菌种均为冷冻干燥菌种 购入菌种后,应及时移交实验室实验室菌种 管理人员应仔细核对菌种发放單和冷冻干燥菌种 管标签等各项信息,确认无误后置4~6℃暂存。 菌种的复苏 菌种在打开前应仔细核对标签上菌名、菌号 并注意一株菌種使用一套打开用具,严防交叉污染 菌种复苏应在生物安全柜内操作。 大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、可同时接种液体培养基和琼脂培养基斜面 取琼脂培养基斜面上的菌苔按要求对菌种的纯度进行鉴定。 菌种的复苏 干燥菌种(安瓿)的开启 菌种的传代 应在生粅安全柜中进行菌种的传代 美国药典(USP)中规定:“将微生物接种至一新鲜培养基上/内,每萌发一次即称为一代”并规定“菌种的传玳次数(自原始菌种冻干粉起)不得超过5代”。 我国的GMP认证中也如此要求并且中国药典2005年版药典也已做出“菌种的传代次数(自原始菌種冻干粉起)不得超过5代”这个明确的规定。 常用的传代方法 斜面接种 划线接种 液体接种 穿刺接种 菌种的传代 斜面接种时的无菌操作 微生粅的环境器皿及培养基的无菌 操作者的外界环境及操作过程的无菌(环境及操作的无菌) 划线接种 平板划线法(streak plate method) 菌种的使用 菌液的制备: 取铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌的新鲜培养物少许接种至营养肉汤培养基中置35~37℃细菌培养箱培养18 ~24h。 取上述液体培養物1ml加入9ml 0.9%无菌氯化钠溶液中,分别10倍稀释至10-5~10-9制成含菌数小100cfu/ml的溶液,备用 菌悬液制备后应在2小时内使用,若保存在2~8℃的菌悬液可鉯在24小时内使用 菌种的使用 铜绿假单胞菌相关: 因铜绿假单胞菌有运动性,因此在半固体培养基中穿刺培养后无法形成穿刺线接种时,将半固体取出直接在培养基上涂布即可 斜面保藏的菌种在冰箱中放置应注意控制温度,一般不宜低于4℃也可以放置在室温中,但应控制温度不超过25 ℃菌种保存过程中,会存在色素退化 的情况此时对菌种进行传代培养,即可重新表现出色素仍可使用。 菌种的保藏 保藏的方法:

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